猪圆环病毒3型抗体ELISA检测方法建立及其应用

摘要

本研究将猪圆环病毒3型(PCV3)Cap蛋白截去核定位序列(NLS)后对应的dCap基因克隆至pET28a(+)并转入大肠杆菌BL21(DE3),得到重组菌后进行蛋白表达.采用镍离子亲和层析纯化dCap蛋白.将纯化的dCap蛋白作为抗原进行包被,建立检测PCV3抗体的间接ELISA方法,并对湖南省1175份临床血清进行检测.结果显示:dCap蛋白主要以包涵体形式表达,当以pH为10.83的碳酸盐缓冲液将纯化的dCap蛋白稀释到0.2 μg/mL并进行包被,且血清50倍稀释,酶标二抗1∶8000稀释时,ELISA的反应条件最佳,确定S/P临界值为0.270,批内及批间差异均小于10％,本方法与PCV2、CSFV、PRV和PRRSV阳性血清无交叉反应.对湖南省11个地级市的29个猪场的血清流行病学调查结果表明:PCV3抗体猪场阳性率为100％(29/29),样品总阳性率为58.64％(689/1175),但阳性样品主要集中在肥猪和母猪,且阳性率在肥猪阶段明显上升,说明猪群感染PCV3主要是在育肥阶段.