TaqMan荧光定量PCR检测猪流行性腹泻病毒方法的建立与初步应用

摘要

根据GenBank中公布的猪流行性腹泻病毒N基因序列,设计了一对特异性引物和探针,扩增长度为186bp的片段.以克隆N基因的质粒作为阳性标准品,建立了一种快速检测猪流行腹泻病毒含量的TaqMan 荧光定量PCR方法.该方法在108～101 copies/μL范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中10copies/μL的质粒DNA,以猪圆环病毒、猪乙脑病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒为模板时,均检测不到荧光信号,而重复性实验中其变异系数均小于2%,表明此方法具有很好的特异性和重复性.应用此方法对采集的60份临床样品进行检测,其阳性检出率为92%,而用常规RT-PCR方法进行检测,阳性检出率仅为80%.表明荧光定量RT-PCR方法的敏感性明显高于常规PCR检测方法.