线粒体通透性转换孔在七氟醚抑制氧糖剥夺-复糖复氧诱发大鼠神经元凋亡中的作用

摘要

目的评价线粒体通透性转换孔（mPTP）在七氟醚抑制氧糖剥夺-复糖复氧诱发大鼠神经元凋亡中的作用。方法出生24 h内的SD大鼠,体外分离原代皮质神经元,以1×10~6个/ml的密度接种于6孔板（2ml/孔）培养皿,采用随机数字表法分为5组（n=72）:对照组（C组）神经元正常培养;氧糖剥夺-复糖复氧组（O组）神经元行氧糖剥夺90 min;mPTP开放剂组（A组）和mPTP开放剂+七氟醚组（AS组）神经元在行氧糖剥夺后即刻加入mPTP开放剂苍术苷20μmol/L;七氟醚组（Sev组）和AS组神经元在氧糖剥夺后即刻给予2%七氟醚处理1 h;O组和A组复糖复氧24 h,Sev组和AS组复糖复氧23 h后收集神经元。采用Annexin V-FITC/PI双染色法计数凋亡神经元,计算神经元凋亡率,采用MTT法测定神经元存活率;采用荧光探针JC-1法检测线粒体膜电位（MMP）水平;采用酶标仪测定mPTP开放程度;采用RT-PCR和免疫印迹法测定促凋亡因子Bid、Bim、Puma及其mRNA的表达。结果与C组比较,其余各组神经元凋亡率升高,神经元存活率和MMP降低,mPTP开放程度增加,Bid、Bim和Puma及其mRNA表达上调（P＜0.05）;与0组比较,Sev组神经元凋亡率降低,神经元存活率和MMP升高,mPTP开放程度降低,Bid、Bim和Puma及其mRNA表达下调（P＜0.05）;与Sev组比较,A组和AS组凋亡率升高,神经元存活率和MMP降低,mPTP开放程度增加,Bid、Bim和Puma及其mRNA表达上调（P＜0.05）;与A组比较,AS组神经元凋亡率降低,神经元存活率和MMP升高,mPTP开放程度降低,Bid、Bim和Puma及其mRNA表达下调（P＜0.05）。结论七氟醚通过抑制mPTP开放减轻氧糖剥夺-复糖复氧诱发的大鼠神经元凋亡。