连结蛋白36和闭锁小带蛋白1的PDZ结构域关系

摘要

目的:探讨连结蛋白36(Cx36)和闭锁小带蛋白1(ZO-1)相互作用的PDZ结构域.方法:构建pGEX-3XGST-PDZ重组载体在DH5α细菌表达,加IPTG产生融合蛋白,经纯化,免疫印迹分析Cx36与ZO-1相互作用的PDZ结构域,PVDF膜洗脱后抗GST和考马斯亮蓝染色.结果:构建了pGEX-3X GST-PDZ重组载体,与转染Cx36的HeLa细胞孵育,免疫印迹显示Cx36与ZO-1的PDZ1结构域结合.而对照组Cx43与ZO-1的PDZ2结构域结合.实验组在相对分子质量为40 000～42 000有蛋白带,提示GST-PDZ融合蛋白表达.与鼠视网膜组织孵育免疫印迹显示Cx36与ZO-1的PDZ1结构域结合,而对照组Cx43与ZO-1的PDZ2结构域结合,相同膜洗脱后抗GST抗体和考马斯亮蓝染色显示GST-PDZ融合蛋白表达.结论:Cx36与ZO-1的PDZ1结构域结合.