基于生物条形码结合杂交链式反应双重信号放大检测蓖麻毒素

摘要

建立了一种基于生物条形码结合杂交链式反应扩增的高灵敏、特异性检测蓖麻毒素(Ricin toxin,RT)的方法.使用RT多克隆抗体(pAb)及条形码DNA(Barcode DNA)制备功能性金纳米探针(GNPs),通过与RT单克隆抗体(mAb)共同识别作用,形成"mAb-RT-pAb/AuNPs/Barcode DNA"三明治夹心结构,进一步利用条形码DNA作为引发链触发生物素标记的发卡探针进行杂交链式扩增,形成一条具有重复单元的长双链DNA.当使用辣根过氧化物酶标记链霉亲和素与长链DNA上的生物素结合后,通过鲁米诺与过氧化氢的化学发光底物发光进行测定.结果表明,本方法检测RT的线性范围为0.61 ng/mL～5.00μg/mL,检出限为0.52 ng/mL(S/N=3),本方法具有较宽的检测范围及较低的检出限,测定饮用水及脱脂牛奶样品中RT的加标回收率在83.4％ ～112.4％之间,相对标准偏差在2.2％ ～5.4％之间,表明本方法实用性良好,在食品和饮用水安全控制及防范生物恐怖袭击方面具有良好的应用前景.