基于外源荧光探针的脱氧核酶切割RNA反应动力学参数测定方法的改进

摘要

对以EB作为外源荧光探针测定脱氧核酶切割RNA反应的动力学参数的方法进行了改进.实验结果表明:对于目前应用最为广泛的10-23脱氧核酶和8-17脱氧核酶,在生理条件下(150 mmol/L KCl, 2 mmol/L MgCl2, pH 7.5, 37℃)采用改进方法测得的反应动力学参数(kobs 10-23＝0.12 min-1, kobs 8-17=0.08 min-1)与原方法相比更接近于放射性标记方法的测定结果(k2 10-23＝0.13 min-1, k2 8-17=0.08 min-1).