大鼠Aggrecanse-1,2特异性shRNA慢病毒表达载体的构建及测序

摘要

目的:利用RNA干扰技术,以大鼠aggrecanse-1,2基因为靶基因,设计aggrecanse-1,2基因特异性的小干扰RNA(siRNA),构建其短发夹RNA(shRNA)重组慢病毒表达载体,并进行测序鉴定.方法:根据Tuschl原则设计并合成大鼠aggrecanse-1,2基因特异性的DNA寡核苷酸,连接到经BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切线性化的pKCSHR-GFP质粒上,转化大肠杆菌DH5 α感受态细胞,筛选阳性菌落、扩增后提取质粒,进行DNA测序鉴定.结果:将合成的8对大鼠aggrecanse-1,2基因特异性DNA寡核苷酸序列退火后,分别克隆到线性化的pKCSHR-GFP载体质粒上.在氨苄青霉素培养基条件下,筛选出相应的阳性菌落,经DNA测序鉴定确定为设计的序列.结论:成功构建了8对大鼠aggrecanse-1,2基因特异性shRNA重组慢病毒表达载体,可进一步用于干扰aggrecanse-1,2基因的mRNA转录,从而为制备aggrecanse-1,2基因表达受抑制的大鼠软骨细胞奠定基础.