益肾活血方通过miR-126/VEGF-Notch信号通路改善肾纤维化

摘要

目的 探讨益肾活血方通过调控微小RNA-126/血管内皮生长因子- Notch（miR-126/VEGF-Notch）信号通路延缓肾纤维化发展的分子机制.方法 按照随机数字表法将90只雄性SD大鼠平均分为假手术（Sham）组、单侧输尿管结扎术（UUO）模型组、氯沙坦治疗组（50 mg·kg^-1·d^-1）以及高、中、低剂量益肾活血方治疗组（25.2、12.6、6.3 mL/kg）.各治疗组于UUO制模结束当日开始灌胃给药,直至实验结束.术后7、14、21 d取大鼠左侧肾脏,用苏木素-伊红（HE）和Masson染色于镜下观察肾组织病理学改变,并计算肾纤维化评分;用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肾组织miR-126、血管内皮生长因子A（VEGFA）、血管内皮生长因子受体2 （VEGFR-2）、Notch1的mRNA表达.结果 ① 病理结果：Sham组肾组织形态正常.UUO模型组肾小管扩张,肾间质炎性细胞增多,术后7 d即可见肾小管间质纤维化,并随时间延长程度逐渐加重;术后各时间点肾纤维化评分较Sham组明显增高.各治疗组肾脏肿胀程度、肾实质萎缩等均较UUO模型组有所改善;中、高剂量益肾活血方组和氯沙坦组术后7 d肾纤维化评分即明显低于UUO模型组（分：1.00±1.00、0.91±0.58、1.01±0.58比2.00±0.00,均P＜0.01）,而低剂量益肾活血方组肾纤维化评分与UUO模型组无明显差异.② RT-PCR结果：UUO模型组术后各时间点肾组织miR-126、VEGFA、VEGFR-2及Notch1的mRNA表达量均较Sham组明显升高.与UUO模型组比较,中、高剂量益肾活血方组和氯沙坦组术后7 d肾组织miR-126、VEGFA、VEGFR-2及Notch1的mRNA表达量即明显升高〔miR-126（2-ΔΔCt）：0.465±0.067、0.639±0.092、0.404±0.069比0.132± 0.021,VEGFA（2-ΔΔCt）：0.024±0.005、0.027±0.007、0.023±0.006 比 0.014±0.006,VEGFR-2（2-ΔΔCt）：0.021±0.007、0.023±0.008、0.019±0.007 比 0.012±0.004,Notch1（2-ΔΔCt）：0.017±0.004、0.020±0.005、0.018±0.005比0.007±0.004,均P＜0.05〕,且中、高剂量益肾活血方组各指标基因表达量较氯沙坦组有一定上升趋势（但P＞0.05）;而低剂量益肾活血方组各指标基因表达量与UUO模型组比较差异无统计学意义.结论中、高剂量益肾活血方可以有效拮抗肾纤维化,其机制可能是通过上调miR-126/VEGF-Notch信号通路,从而介导肾脏微血管新生,最终改善肾微血管损伤和延缓肾纤维化进程.