神经肽P物质调控Notch信号通路对胎鼠高氧肺损伤后Ⅱ型肺泡上皮细胞增殖的影响

摘要

目的探讨神经肽P物质（SP）对胎鼠高氧肺损伤后Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）增殖的影响及其可能机制。方法取孕18 d胎鼠肺组织进行原代AECⅡ分离培养后分为6组。空气组暴露于含21%的氧舱内;高氧组则暴露于含95%的氧舱内;高氧+SP组、高氧+SP+SP受体拮抗剂L703.606组、高氧+SP+Notch信号通路阻断剂MW167组、高氧+MW167组在高氧暴露基础上相应加入1μmol/L的SP、0.03 mmol/L的L703.606、0.2 mmol/L的MW167。干预后4h检测细胞活性,于6、12、18、24 h计数细胞并描绘增殖曲线,24 h于倒置显微镜下观察细胞形态及增殖情况并检测细胞周期;用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测Notch信号通路配体Dll1、Dll4以及靶基因Hes1的mRNA表达。结果经高氧或Notch信号通路阻断剂MW167处理后,各组细胞计数均较空气组明显减少,且细胞活性明显降低,出现G1期阻滞现象,细胞增殖能力明显受抑;镜下可见核固缩、胞内颗粒物减少等变化;同时Notch通路相关基因Dll1、Dll4、Hes1的mRNA表达量明显下降。与高氧组比较,SP干预后细胞计数增多,胞内颗粒物质增加,且细胞活性明显升高（A值:75.5±14.9比44.9±8.4）,G1期比例降低[（62.87±3.99）%比（67.47±2.28）%]、S期比例升高[（32.54±2.71）%比（25.03±3.52）%],说明细胞增殖能力明显增强（均P＜0.05）;同时Dll1、Dll4、Hes1的mRNA表达量均明显上调(2-△△Ct:1.44±0.13比0.92±0.04,0.80±0.17比0.35±0.08,1.20±0.09比0.85±0.08,均P＜0.05)。而此时再加入SP受体拮抗剂L703.606或Notch信号通路阻断剂MW167,可再次出现细胞增殖受抑的表现,且细胞活性再次降低（A值:60.0±9.5、37.7±21.7比75.5±14.9）,G1期比例增加[（73.96±3.53）%、（92.44±1.75）%比（62.87±3.99）%]、S期比例降低[（20.54±2.24）%、（14.25±3.84）%比（32.54±2.71）%],说明细胞增殖能力再次被抑制（均P＜0.05）;同时Dll1、Dll4、Hes1的mRNA表达量明显下调(2-△△Ct:0.65±0.01、0.49±0.15比1.44±0.13,0.07±0.01、0.27±0.03比0.80±0.17,0.59±0.11、0.48±0.06比1.20±0.09,均P＜0.05)。结论 SP可能通过调控Notch信号通路表达来适当促进AECⅡ的增殖、减少其氧化损伤,从而对高氧肺损伤发挥一定的保护作用。