褪黑素对百草枯诱导小鼠急性肝损伤的干预作用及其机制

摘要

目的探讨褪黑素（MT）对百草枯（PQ）染毒小鼠肝损伤的保护作用及其可能机制。方法将48只雄性BALB/c小鼠按随机数字表法分为正常组（n=6）、MT对照组（n=6）、PQ染毒组（n=18）、MT干预组（n=18,PQ染毒1h±MT）;腹腔注射给药,MT为15 mg/kg,PQ为30 mg/kg;后两组再按给药后不同时间点分为12、24、72 h亚组,每个亚组6只。干预后不同时间点于小鼠内眦取血并取肝组织,用碘比色法检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）含量,用双抗夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）测定肝组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平,用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测肝细胞核内核转录因子-κB p65（NF-κB p65）的蛋白表达;经苏木素-伊红（HE）染色后光镜下观察肝组织病理学改变。结果与正常组比较,PQ染毒组在染毒后12 h血清ALT、AST水平和肝组织TNF-α水平即明显升高,24 h达峰值[ALT（U/L）:417.88±76.16比41.76±3.63,AST（U/L）:469.79±69.81比53.19±6.31,TNF-α（pg/mg）:46.39±9.81比13.01±3.19,均P＜0.05],之后逐渐下降;肝组织IL-1β水平和细胞核内NF-κB p65表达随时间延长持续升高,72 h达峰值[IL-1β（pg/mg）:30.74±5.81比3.81±0.71,NF-κB p65蛋白（灰度值）:1.70±0.14比0.85±0.08,均P＜0.05]。MT干预可明显抑制PQ染毒导致的上述指标异常升高,与PQ染毒组比较,MT干预组血清AST和肝组织TNF-α、IL-1β水平于12 h起即明显降低[AST（U/L）:269.35±11.34比391.11±8.71,TNF-α（pg/mg）:15.10±5.03比28.77±5.96,IL-1β（pg/mg）:6.23±1.03比10.89±3.02,均P＜0.05],血清ALT水平和细胞核内NF-κB p65蛋白表达于24 h起明显降低(ALT（U/L）:249.38±21.71比417.88±76.16,NF-κB p65蛋白表达（灰度值）:1.13±0.07比1.45±0.09,均P＜0.05]。光镜下观察显示,正常组肝细胞无病理学改变;PQ染毒组肝组织出现炎性细胞广泛浸润,中心静脉、血窦出现扩张、充血,并有肝细胞坏死;MT干预组肝细胞病理学改变较PQ染毒组明显减轻。正常组与MT对照组上述各指标比较均无差异。结论 MT可通过抑制NF-κB p65的过度活化和减少TNF-α的释放,减轻PQ中毒引起的肝细胞坏死程度,从而起到肝脏保护作用。