雷公藤红素激活AMPK信号通路抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用研究

摘要

目的:研究雷公藤红素(celastrol,Cel)抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用并探讨其作用机制.方法:CCK-8法检测不同浓度(0.5,1,2.5,5,10,25,50μmol·L-1)Cel抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用;流式细胞术检测不同浓度(1,2.5,5μmol·L-1)Cel对肝癌HepG2细胞周期分布的影响;Western blot法检测Cel对肝癌HepG2细胞中周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、周期素A2抗体(Cyclin A2)等增殖相关蛋白和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α(p-AMPKα,Thr172)、固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)、脂肪酸合酶(FASN)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)等脂代谢相关蛋白表达的影响;在蛋白激酶B(Akt)/原癌基因c-Met过表达肝癌HepG2细胞中运用AMPK抑制剂Dorsomorphin(Compound C)干预,确证Cel抑制肝癌HepG2细胞增殖的机制.结果:Cel对肝癌HepG2细胞增殖具有抑制作用,且具有剂量-时间依赖效应;与对照组比较,不同浓度(1,2.5,5μmol·L-1)Cel能够阻滞肝癌HepG2细胞周期于S期,并显著降低CDK2、Cyclin A2等细胞周期调控蛋白表达水平;同时,Cel能够升高p-AMPKα(Thr172)蛋白表达水平,降低SREBP-1、FASN、ACC等脂代谢关键蛋白的表达水平;在Akt/c-Met过表达肝癌HepG2细胞中,Cel同样能够激活p-AMPKα(Thr172)并降低SREBP-1、FASN、ACC、CDK2、Cyclin A2等脂代谢与增殖相关蛋白的表达水平,但是运用AMPK抑制剂干预后能够逆转Cel对HepG2细胞脂代谢及增殖相关蛋白表达的影响.结论:Cel可能通过激活AMPK信号通路抑制脂代谢及增殖信号活化从而抑制肝癌HepG2细胞增殖.