浙江眼镜蛇蛇毒中神经毒素的分离纯化及其镇痛作用研究

摘要

目的:研究浙江眼镜蛇(Najanajaatra)蛇毒的镇痛活性组分,为寻找镇痛效果好,而无成瘾性的新型镇痛药奠定基础.方法:通过两次CM-SephadexC-25和一次SephadexG-50柱层析对眼镜蛇毒进行了分离纯化.采用PAGE法对分离纯化后的眼镜蛇神经毒素(cobroneurotoxin,CNT)纯度进行鉴定;以SDS-PAGE法测定CNT的分子量;等电聚焦法(Isoelectrofocusing,IEF)测定CNT的等电点;以Lowry法测定其蛋白含量;用醋酸扭体法、热板法与电刺激法考察CNT的镇痛活性并通过测定LD50考察其毒性.结果:眼镜蛇毒经3次柱色谱后,CNT经鉴定为单一组分.经SDS-PAGE法测定其分子量为7000,等电点为10.2,蛋白含量为92%.CNT能显著降低小鼠对化学刺激与电刺激的敏感性;小鼠痛阈百分率的提高可达51.3%,并呈一定的量效关系;小鼠腹腔注射的LD50为81μg·kg-1,95%可信限为58～104μg·kg-1.结论:眼镜蛇毒经3次柱色谱后得到具有镇痛活性的单一组分(CNT).