碱性成纤维细胞生长因子对肿瘤坏死因子-α联合放线菌酮协同诱导的人软骨细胞损伤的保护作用及机制研究

摘要

目的探究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人软骨细胞在体外炎症环境下的保护作用及相关机制。方法采用50 ng/ml肿瘤坏死因子(TNF-α)联合1μmol/L放线菌酮(CHX)建立人原代软骨细胞损伤模型并评估bFGF对损伤模型的影响。bFGF低、高剂量给药组是在模型组给药的基础之上分别给予1、10 ng/ml的bFGF。在bFGF给药48 h后采用MTT法检测其对模型细胞活力的影响,bFGF处理24 h后采用流式细胞术探究其对模型细胞凋亡和线粒体膜电位的影响,采用Western bolt检测bFGF处理24 h后对模型细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果模型组(1μmol/L CHX+50 ng/ml TNF-α)的细胞活力明显低于对照组,差异有高度统计学意义(P<0.01);bFGF低剂量和高剂量组细胞的细胞活力高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。流式结果显示,bFGF低剂量和高剂量组的凋亡率低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。JC-1染色结果显示,bFGF高剂量组细胞FITC阳性比率低于模型组,差异有高度统计学意义(P<0.01)。Western bolt显示,bFGF给药组细胞Bcl-2蛋白的表达水平高于模型组,Bax蛋白的表达水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论bFGF可以通过抑制线粒体膜损伤和调控凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达等机制,对炎症环境下软骨细胞的损伤产生保护作用,具有潜在的应用前景。