一种基于RNA-seq验证的人肾癌细胞和正常细胞原代培养方法

摘要

目的 建立更加快速便捷的肾脏肿瘤及正常肾小管上皮细胞原代培养方法 .方法 选取2019年1—3月首都医科大学附属北京朝阳医院行肾癌根治性切除术和肾部分切除术后患者新鲜的肾透明细胞癌组织和肾脏皮质组织.采用机械分解,胶原酶消化和细胞连续筛分提纯的方法 提纯肿瘤和正常原代细胞.分别通过转录组测序(RNA-seq)技术鉴定两种原代细胞的遗传背景,免疫细胞化学鉴定细胞标志物的表达,透射电镜观察原代细胞的超微结构.最后采用裸鼠荷瘤模型鉴定肿瘤细胞的成瘤特性.结果 共计分离纯化3株人近端肾小管上皮原代细胞,8株肾透明细胞癌原代细胞.RNA-seq显示测序结果 符合两类细胞的遗传学背景,免疫细胞化学可鉴定出近端肾小管上皮细胞标志蛋白的表达.透射电镜可观察到两类细胞特异性超微结构.裸鼠荷瘤模型证实了肾癌原代细胞的成瘤特性.结论 成功建立并确定一种快速便捷的肾癌细胞和肾小管上皮细胞原代培养的流程和方法 .