miRNA-1和miRNA-133过表达对诱导性多能干细胞心肌分化的影响

摘要

目的 探讨miRNA-1和miRNA-133过表达对诱导性多能干细胞(iPSC)心肌分化的影响.方法 取2周龄美国国家癌症研究所(ICR)孕鼠的胚胎,0.5 g/L胰酶消化接种,传至3代后采用丝裂霉索进行处理,37℃孵育培养小鼠诱导性多能干细胞(miPSC),将生长于胚胎成纤维细胞上的miPSC消化传代;更换培养基,加入对照miRNA (U6)(10 nmol/L,记为对照组),miRNA-1 (10 nmol/L,记为miRNA-1组)、miRNA-133(10 nmol/L,记为miRNA-133组)、miRNA-1和miRNA-133(分别为10 nmol/L,记为miRNA-1+ 133组)转染24 h后PBS洗涤,加入miPSC分化培养基,观察每日变化并计算细胞搏动率以表示分化效率.RT-PCR检测miRNA-1、miRNA-133及心肌肌钙蛋白 T(cTnT)的表达.结果 未分化的miPSC中较少表达cTnT,与分化0 d时比较,分化5 d后miRNA-1组及miRN A-133组内cTnT的表达水平明显升高(P＜0.05),分化10d时升高更明显(P＜0.01) 分化10d时,miRNA-1+133组cTnT表达水平较miRNA-1组及miRNA-133组更高(P＜0.01).与对照组比较,miRNA-1组及miRNA-133组细胞搏动率无变化(P＞0.05),但miRNA-1+133组搏动率显著提升(P＜0.01) 结论 单独应用miRNA-1或miRNA-133对心肌的分化无促进作用,共表达miRNA-1、miRNA-133 可显著提高miPSC向心肌细胞定向分化的效率.