应用双重PCR技术快速鉴定结核与非结核分支杆菌

摘要

目的:建立双重PCR技术快速鉴定结核与非结核分支杆菌.方法:通过试验选择双重PCR最佳反应条件,检测引物A1、A2和B1、B2扩增分支杆菌的特异性及扩增结核分支杆菌的敏感性,并对34株结核分支杆菌和非结核分支杆菌临床分离株鉴定.结果:引物A1、A2能扩增所试24种分支杆菌,B1、B2仅扩增结核分支杆菌复合体菌种,两对引物扩增12种非分支杆菌均为阴性.结果表明,用引物A1、A2扩增分支杆菌属共有的65 KDA抗原基因383 BP片段和B1、B2扩增结核分支杆菌复合体特异的插入序列IS1081 238 BP片段鉴定结核与非结核分支杆菌是特异的.两对引物双重PCR检测结核分支杆菌DNA的敏感性分别为1 PG和100 FG.双重PCR检测34株临床分离株,结核分支杆菌可见383 BP和238 BP两条扩增带,非结核分支杆菌仅见383 BP一条扩增带.据此差别,能将结核与非结核分支杆菌鉴别开,并能在1～2 D完成试验.结论:双重PCR技术为结核及非结核分支杆菌的快速鉴定提供了一个可供选择的手段.