利用琼脂磁珠作为载体建立快速HIV-P24核酸适配体的筛选方法

摘要

目的:利用磁珠作为载体,建立快速HIV-P24核酸适配体的SELEX筛选方法.方法:利用SELEX技术、磁珠分离及实时定量PCR技术,从随机寡核苷酸库中快速筛选出能与HIV-P24特异结合的寡核苷酸,利用凝胶阻滞实验鉴定所筛选到的HIV-P24核酸适配体复合物,通过连接Pmdl8-Tvector,转化E.ColiDH5a感受态细胞得到了阳性克隆.结果:经过4轮筛选并运用凝胶阻滞实验验证了HIV-P24核酸适配体复合物条带明显被阻滞,利用交错PCR鉴定了所挑取的阳性克隆,也得到了测序序列.结论:利用SELEX技术、磁珠核酸分离技术和实时定量PCR技术成功筛选到了2条能与HIV-P24特异性结合的核酸适配体,这几种方法相结合操作简单、能有效提高筛选效率,并且便于机械化操作,为今后的适配体筛选打下良好基础.