伪狂犬病病毒pUL34核膜定位和功能的结构性决定因素研究

摘要

疱疹病毒蛋白pUL34和pUL31在内核膜(INM)形成的复合物对于有效的核释出是必需的。伪狂犬病病毒(PRV)pUL34是含262个氨基酸(AA)的Ⅱ型膜蛋白。预测跨膜区(TM)位于245-261位,C端只有一个氨基酸,可能延伸到核周间隙。在缺失其他病毒蛋白时,其靶向核膜的固有定位基序,其结构与细胞INM蛋白,如Lap2β和Emer-in相似。为研究pUL34中与定位和功能有关的结构域,通过用细胞INM蛋白区域替换pUL34部分区域构建了嵌合蛋白。将C端18个氨基酸,包括TM替换为Lap2β和Emerin的TM和C端结构域,或核纤层蛋白B受体(LBR)的第一个TM,包括其后的9个氨基酸。所有由此产生的嵌合蛋白都弥补了PRV-ΔUL34的复制缺陷,表明TM的替代和C端结构域的扩展都不会干扰pUL34的功能。当C端50个氨基酸用相应的Lap2β序列取代(pUL34-LapCT50),其互补作用降低,但并没有阻断。然而,C端100个氨基酸(pUL34-LapCT100)替换后虽然仍能与pUL31结合,但会产生一个无功能的蛋白,说明这个区域在蛋白功能中起着重要的作用。N端100个氨基酸(pUL34-LapNT100)的替换对核膜定位没有影响,但能阻断pUL31的结合和功能。