连翘提取物对对乙酰氨基酚诱导小鼠肝损伤的保护作用

摘要

试验旨在探究连翘提取物(FSE)预防性干预对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导小鼠肝损伤的保护作用及其潜在作用机制.采用半仿生-生物酶法提取连翘有效成分,使用APAP构建小鼠肝损伤模型.随机将60只雌性昆明小鼠分入正常对照(NC)组、APAP肝损伤模型(LD)组、连翘提取物(FSE)对照组、连翘提取物高剂量(HFSE+LD)组、连翘提取物中剂量(MFSE+LD)组和连翘提取物低剂量(LFSE+LD)组,每组10只.HFSE+LD组、MFSE+LD组、LFSE+LD组分别按每天200、100、50 μg/g灌胃给予连翘提取物,NC组和LD组分别灌胃等量生理盐水,每天2次,连续给药6 d.预防性给药3 d后,腹腔注射APAP,每天1次.末次给药12 h后,试验小鼠眼球采血并快速取出肝脏,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,以评价肝损伤程度;检测肝脏匀浆液中还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和过氧化氢(H2O2)水平,以评价肝脏氧化应激程度;制作肝脏病理切片,经苏木精伊红(HE)染色后观察肝脏病理变化;采用探针药物法测定肝脏线粒体细胞色素P4502E1(CYP2E1)活性;采用实时荧光定量PCR检测肝脏线粒体CYP2E1 mRNA表达水平;采用Western blotting法检测肝脏CYP2E1蛋白表达情况.结果表明:与NC组相比,LD组小鼠血清中ALT、AST活性均显著增加(P＜0.05);肝脏SOD活性、GSH含量均显著降低(P＜0.05),MDA、H2O2含量,CYP2E1 mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05),成功构建小鼠肝损伤模型.200、100和50 μg/g的连翘提取物可显著降低肝损伤小鼠血清ALT和AST活性(P＜0.05),显著提高肝脏中SOD活性(P＜0.05);200、100 μg/g连翘提取物可显著提高肝脏中GSH水平(P＜0.05),显著降低肝脏中MDA、H2O2水平及CYP2E1的mRNA和蛋白表达量(P＜0.05).以上结果表明,连翘提取物可减轻APAP诱导的小鼠肝损伤程度且呈剂量依赖性,其潜在作用机制可能与所含活性物质的抗氧化作用以及对CYP2E1酶活性和表达的抑制有关.