猪肝星状细胞内质网应激模型的建立及对泛素化的影响

摘要

cqvip:试验对衣霉素(tunicamycin,TM)处理猪肝星状细胞的浓度和培养时间进行筛选,以期成功构建内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)模型,并在此基础上探究ERS下猪肝星状细胞泛素化的变化。试验采用浓度为0、1、2、5、10和15μg/mL的TM处理猪肝星状细胞,培养2、4、8、16、24和36 h。通过检测细胞抑制率对TM浓度和培养时间进行初筛;通过检测细胞周期及ERS标志基因和蛋白表达对TM浓度和培养时间进行终选,以确定是否成功构建ERS模型,同时,在ERS下检测猪肝星状细胞泛素化相关基因的表达变化。结果表明:由细胞抑制率检测结果初步确定TM浓度5μg/mL、培养8或24 h后有可能出现ERS。5μg/mL TM在培养8或24 h时,ERS标志基因表达均极显著上调(P<0.01)。在培养8 h时,ERS标志蛋白中仅ATF4显著上调(P<0.05),细胞周期中仅G2/M期细胞比例显著下降(P<0.05);在培养24 h时,ERS标志蛋白均显著上调(P<0.05),细胞周期在G1期出现阻滞,并导致S期和G2/M期细胞比例极显著下降(P<0.01)。以上结果说明,5μg/mL TM培养24 h可成功构建细胞ERS模型。在ERS下,细胞泛素化相关基因UBA 2和UBE 2 E的表达均极显著升高(P<0.01)。综上,猪肝星状细胞经5μg/mL TM处理24 h,可成功建立ERS模型,并启动泛素化机制。