牦牛Bcl-2、Bax基因克隆及其在生殖轴上的表达分析

摘要

试验旨在分析Bcl-2与Bax基因的序列特性,并分析其在母牦牛生殖轴上的表达特点,为探讨其在牦牛繁殖活动中的调控作用奠定基础.试验采集健康母牦牛与母黄牛下丘脑、垂体、卵巢、输卵管及子宫组织样品,通过RT-PCR扩增并克隆Bcl-2与Bax基因,并采用生物信息学软件进行序列分析;利用实时荧光定量PCR法检测Bcl-2与Bax基因在牦牛与黄牛不同组织中的表达差异.结果 表明,牦牛Bcl-2编码区全长690 bp,编码229个氨基酸;与黄牛Bcl-2基因核苷酸序列同源性最高,为99.86％,其次是山羊、绵羊,同源性分别为98.41％、97.97％;系统进化树表明,牦牛与黄牛亲缘关系最近.牦牛Bax基因编码区全长579 bp,编码192个氨基酸,与黄牛、藏山羊和金堂黑山羊同源性较高,分别为99.83％、99.48％和99.48％,其次是绵羊、马、人,同源性分别为99.14％、95.3444％、94.30％;系统进化树表明,牦牛与黄牛亲缘关系最近.Bcl-2和Bax蛋白不存在信号肽,均为酸性不稳定的疏水蛋白.Bcl-2与Bax基因在黄牛及牦牛下丘脑、垂体、卵巢、输卵管和子宫组织中均有表达,其中牦牛卵巢、子宫中Bcl-2基因表达量分别显著和极显著高于黄牛(P＜0.05;P＜0.01);牦牛子宫、输卵管中Bax基因表达量显著高于黄牛(P＜0.05),牦牛卵巢中Bcl-2/Bax比值极显著高于黄牛(P＜0.01),子宫和垂体中显著高于黄牛(P＜0.05).表明Bcl-2与Bax在动物进化中非常保守且在繁殖活动中起重要作用,牦牛卵巢、子宫、输卵管和垂体中的高表达量可能与牦牛处于极端恶劣环境的细胞抗凋亡作用有关.