冷、热应激对猪孤雌胚胎体外发育的影响

摘要

为研究持续不同时间的冷、热应激对猪孤雌胚胎体外发育的影响,本研究以猪孤雌胚胎为材料,采用免疫荧光染色、实时荧光定量PCR技术检测不同时间的冷(31℃)、热应激(41℃)处理对猪孤雌胚胎发育后囊胚发育率、细胞数、细胞凋亡率、自噬相关基因及细胞凋亡相关基因mRNA转录水平的影响.结果显示,热应激12h后囊胚发育率显著低于对照组(P＜0.05),冷应激18 h后囊胚发育率显著低于对照组(P＜0.05),而冷应激组囊胚发育率高于热应激组.热应激12 h和冷应激18 h后均导致囊胚内细胞数显著低于对照组(P＜0.05),细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.05),且冷应激组的细胞凋亡率低于热应激组.冷、热应激组自噬相关蛋白LC3的表达均高于对照组;冷、热应激中自噬相关基因Atg6和Atg8的表达均极显著高于对照组(P＜0.01),Lamp2基因的表达均显著高于对照组(P＜0.05),热应激组中的Atg6和Atg8基因的表达高于冷应激组.通过检测细胞凋亡相关基因mRNA的转录水平发现,冷、热应激组中细胞凋亡相关基因Bak、Casp-3、Fas的表达均极显著高于对照组(P＜0.01),Bcl-xl基因的表达均显著低于对照组(P＜0.05).综上,猪孤雌胚胎对冷应激(31℃)的耐受性比对热应激(41℃)强,且热应激可诱导体外培养的猪孤雌胚胎自噬及凋亡相关基因的表达,从而降低孤雌胚胎发育的能力.