快速鉴定猪链球菌和马链球菌兽疫亚种双重PCR方法的建立

摘要

本试验旨在建立一种快速、特异、敏感的双重PCR鉴定猪链球菌和马链球菌兽疫亚种病原检测方法.根据猪链球菌GDH蛋白和马链球菌类M蛋白的基因保守区分别设计引物,优化了该双重PCR检测方法的引物浓度及比例,并筛选了其最佳退火温度；用该双重PCR反应体系以其他几株阴性菌株为对照,检测了该反应体系的特异性.以新鲜培养的猪链球菌倍比稀释后进行菌落计数,对该检测方法的敏感性进行了鉴定.M-like和GDH引物的加入量均为1μL(20 pmol/L),最佳退火温度为52.3℃；该双重PCR反应体系有较高敏感性,检测马链球菌兽疫亚种和猪链球菌的敏感度分别达100和10 CFU；特异性试验结果显示,常见的5种病原菌在该双重PCR体系中无特异性条带出现；临床应用该方法分离鉴定了1株猪链球菌和2株马链球菌兽疫亚种.本试验建立了一种能同时检测猪链球菌和马链球菌兽疫亚种的双重PCR方法,且该方法应用快速、特异且敏感.