鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ基因原核表达和单克隆抗体的制备及鉴定

摘要

本试验旨在制备针对鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ (RIG-Ⅰ)全长蛋白的单克隆抗体.从鸭脾脏eDNA中扩增鸭RIG-Ⅰ基因N端长度均为900 bp的a(1-900 bp)和b(751 1650 bp)2段基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-30a中;重组质粒转化BL21感受态细胞后,经IPTG诱导表达,将获得的目的蛋白免疫BALB/c小鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,并进行间接ELISA检测.结果显示,筛选出17株与分段表达的鸭RIG-Ⅰ蛋白有良好反应性的杂交瘤细胞株,测定单克隆抗体上清效价均为1∶512;间接免疫荧光(IFA)与Western blotting分析结果显示,10H7C3和2A10A2 2株单克隆抗体与原核表达的鸭RIG-Ⅰ全长蛋白有良好的反应性.本研究制备了特异性鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体,为进一步研究RIG-Ⅰ基因的功能奠定了基础.