鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白的原核表达及纯化

摘要

本试验旨在表达并纯化鞭毛蛋白,为研究并获得高效蛋白佐剂奠定基础.用PCR扩增鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因fljB、fljB'和fliC,将扩增产物克隆至pMD19-T Simple Vector上,构建了克隆质粒pMD19-fljB、pMD19-fljB,和pMD19-fliC.克隆质粒经双酶切后将片段克隆至pET-30a中,构建原核表达质粒pET30a-fljB、pET30a-fljB,fliC和pET30a-fliC.经PCR、酶切及测序鉴定后将阳性表达质粒转化至大肠杆菌BL21 (DE3)中,诱导表达后的菌体经超声处理取上清,用Ni柱进行纯化.Western blotting证实了表达的蛋白能与豚鼠抗鞭毛蛋白血清发生特异性反应.通过优化表达条件,鞭毛蛋白fljB、fliC和fljB,fliC均以可溶性表达,纯化得到的鞭毛蛋白为后续评价其佐剂效应奠定基础.