大片形吸虫病早期诊断夹心ELISA方法的建立及应用

摘要

为建立一种早期诊断大片形吸虫病的试验方法,本试验对5株分泌抗大片形吸虫分泌排泄抗原(ES)单克隆抗体的杂交瘤细胞进行复苏、制备单克隆抗体,配对筛选出7D1、7D2单克隆抗体,将7D2作为包被抗体,7D1作为酶标抗体,通过条件优化,建立早期诊断大片形吸虫病的夹心ELISA方法.结果显示,当包被抗体稀释度为1∶6 400 (0.208 μg/mL)、采用5％脱脂奶粉封闭、酶标记抗体稀释度为1∶10 000(0.200 μg/mL)时,最早可检测到感染此病第7天小鼠的血清循环抗原,其敏感性可达到1∶3 200(0.156 μg/mL),与其他几种寄生虫抗原均无交叉反应,具有较高的特异性和稳定性.本试验成功建立了早期检测大片形吸虫病的夹心ELISA方法,为大片形吸虫病的诊治及开发早期诊断大片形吸虫病的试剂盒奠定了基础,具有临床应用价值.