利用荧光标记引物和DNA自动测序仪确定DNA的断裂位点

摘要

定向设计、开发具有特定识别和切割序列的DNA切割试剂（限制性内切酶、金属核酸酶等）在生物技术领域中具有广阔的应用前景．在有关DNA切割的研究工作中，必然涉及切割位点的序列分析，已有的分析方法依赖于Maxam—Gilbert化学断裂法，需要进行同位素标记，容易造成污染；而且操作繁琐，条件控制困难，重复性低，技术要求高；结果依靠放射自显影，灵敏度低而且条带分析有一定的主观性＋我们和RenRui等合作，以Sanger双脱氧法为基本原理，建立了DNA切割位点分析新方法，操作简化，可重复性提高，但是仍然需要进行同位素标记，断裂位点的确定仍有一定的主观性．