细胞周期蛋白依赖性激酶1在S期细胞检测点的激活

摘要

目的以细胞周期特异性T淋巴细胞型白血病Molt-4细胞S期凋亡为模式,检测细胞周期蛋白依赖性激酶1（CDK1）在S期细胞周期检测点蛋白磷酸化及蛋白去磷酸化,探讨细胞周期时相特异性细胞凋亡的CDK1的活性改变。方法对数生长期的人类急性淋巴细胞白血病细胞系Molt-4经喜树碱（CPT）诱导细胞凋亡,经不同的作用时间、剂量处理后,以API法检测细胞凋亡的细胞周期特异性,以分选后激光共聚焦荧光显微镜技术（PSC）对API结果进一步验证,从而获取最佳条件下细胞周期特异性细胞凋亡,蛋白电泳分析法检测CDK1的磷酸化、去磷酸化。结果对数生长期的Molt-4细胞经CTP诱导后发生细胞周期特异性细胞凋亡,CPT0.2μg/ml处理后6 h出现S期特异性细胞凋亡。CTP诱导出现S期特异性细胞凋亡时CDK1-第15位酪氨酸（Tyr15）与对照Western blot结果条带相近,而CDK1-第161位苏氨酸（Thr161）条带较窄。结论细胞凋亡往往伴有细胞周期特异性;经PSC形态学证实的API流式细胞术是有效、快捷的细胞周期特异性细胞凋亡分析方法;CDK1在S期特异性细胞凋亡时磷酸化活性降低。