云南松基因组微卫星富集文库的构建

摘要

采用磁珠富集法构建云南松微卫星富集文库.云南松基因组DNA经Rsa Ⅰ酶切,与特定接头连接,再用接头特异引物进行PCR扩增.连接扩增产物与用生物素标记的(AC)12、(AT)12、(CG)12、(GT)12、(ACG)12、(ACT)12和(CCA)8探针杂交,通过链霉亲和素偶联的磁珠捕捉含接头和微卫星序列的片段并扩增,将获得的片段连接到pMD-19T载体上,转化至大肠杆菌JM109感受态细胞中,成功构建了云南松微卫星富集文库.通过PCR检测从文库中筛选阳性克隆,在383富集阳性菌落中获得阳性克隆257个,经测序分析,在获得的159条序列中,有143条含有SSR,其中完美型占65.73％,非完美型占23.78％,混合型占10.49％.结果表明,磁珠富集法构建云南松基因组微卫星文库高效、可行的,文库的构建为微卫星位点的分离、遗传多样性的分析等奠定基础.