aFGF重组腺相关病毒转染内皮祖细胞

摘要

目的 研究含分泌型人酸性成纤维细胞生长因子(sp-haFGF)基因的重组腺相关病毒(rAAV)感染内皮祖细胞(EPCs)的可行性.方法 用PCR法将FGF-4的信号序列与原始的aFGF基因连接,形成sp-haFGF基因.将此目的基因克隆到AAV载体质粒pAAV-IRES-hrGFP中,并与包装质粒(pAAV-RC)和辅助质粒(pHelper)共转染HEK293细胞,获得编码sp-haFGF的重组腺相关病毒.用浓缩的病毒感染体外培养的EPC,荧光显微镜下观察细胞表达绿色荧光蛋白情况,并用RT-PCR和Western blot方法鉴定sp-haFGF在EPC中的表达.结果 获得含有sp-haFGF的重组腺相关病毒,将其感染EPC后,约20%～30%的细胞出现绿色荧光.用RT-PCR法从被感染细胞中扩增出一条长约560 bp的基因条带,通过Western blot检测到被感染细胞中haFGF蛋白的表达.结论 编码sp-haFGF的重组腺相关病毒能够有效地感染EPC,并在EPC中表达haFGF,为进一步研究转基因的内皮祖细胞移植促血管新生奠定基础.