Quick recovery and characterization of cell-free DNA in seminal plasma of normozoospermia and azoospermia： implications for non-invasive genetic utilities

摘要

我们为恢复没有房间的精液的 DNA (cfsDNA ) 建立了一个快、可靠的方法，由使用 DNA 纯化列上的 binding-washing-elution 过程。低变化(低于 15%) 在 cfsDNA 的三倍的价值之中，数量验证了我们的 cfsDNA 恢复方法的重制度。在精液的血浆之间的类似的 cfsDNA 收益和尺寸分发由过滤获得了， centrifugation 证实了 cfsDNA 的存在。为了调查 cfsDNA， quantitation 和尺寸的一般描述，从 normozoospermic 和 azoospermic 精液的 cfsDNA 的分发被即时 PCR 和电气泳动分别地分析。在有 normozoospermia 的精液的 CfsDNA 集中(n = 11 ) 而更高的 cfsDNA 集中在精子缺乏被观察，是 1.34 0.65 g mL-1 (2.56 1.43 g mL-1， n = 9 ) 。从 1 kb 到 15 kb 和 180-bp 碎片的 multiples 的一个系列的 DNA 碎片的连续分发在每 normozoospermic 和 azoospermic 样品被观察。在一些 azoospermic 样品的不同典型 DNA 梯子破碎含有那 cfsDNA 从 apoptotic 房间部分发源。有 Y 染色体 microdeletion 的已知的信息的 36 个选择 azoospermic 病人的 CfsDNAs 被复合 PCR 和 sY114 (1 450 bp ) 的 PCR 扩大受到一样的 microdeletion 分析。有成功地放大并且提供了象白血球 DNA 的一样的结果的 cfsDNA 的所有复合 PCR 反应。sY114 的 PCR 扩大给了 1 450-bp 期望的 amplicon。我们的数据寻找 biomarker 或诊断过程建议了 cfsDNA 的潜在的使用。