肠道病毒71型感染的星形胶质细胞中EV713C活性与NF-κB信号转导效率的关联

摘要

目的 探究肠道病毒71型感染的星形胶质细胞中肠病毒71(EV71)3C蛋白酶活性与核因子κB(NF-κB)信号转导效率的关联.方法 本研究起止时间为2018年3月至2019年3月.通过将EV71病毒感染星形胶质细胞后,经过质粒提取、转化、定点突变、基因转变等步骤,将TANK结合激酶1(TBK1)复合体切割后,分别导入肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)质粒和TANK结合激酶1(TBK1)质粒,观察其对NF-kB表达的影响.同时,EV71感染后,通过RT-PCR和Western blotting法对细胞内相关基因表达,并对EV713C活性进行检测,得到蛋白酶活性与NF-kB表达关系,判断其关联.结果 EV71感染可诱导TBK1和其复合体蛋白TAB 123的降解,并呈现时间依赖性(24h:TAB1:125.86±39.87;TAB2:352.12±42.36;TAB3:195.20±29.75),但对于肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)和TANK结合激酶1(TBK1)表达无影响.同时,细胞内白细胞介素-6(IL-6)(19.4±0.62)、白细胞介素-8(IL-8)(13.8±2.89)、白细胞介素-12(IL-12)(13.0±0.68)及IL-1β(14.6±0.96)的表达均在12h后显著提高;TAB2可诱导NF-kB激活,而与3C共同表达时可显著抑制NF-kB表达,3C亦可显著抑制由TAK1复合体作用诱导NF-kB的激活.不同浓度EV71感染后,细胞内EV713C活性出现明显差异,而随着蛋白酶活性的增加,细胞内NF-kB mRNA和蛋白的表达均成明显的下调趋势.结论 肠道病毒71型感染的星形胶质细胞中EV713C可通过调节TAK1蛋白表达,达到抑制NF-κB信号转导的作用.