三叶苷对N-甲基-D-天冬氨酸诱导的人神经母细胞瘤细胞损伤的保护作用

摘要

目的研究三叶苷(Trilobatin)对N?甲基?D?天冬氨酸(N?methyL?D?aspartate,NMDA)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH?SY5Y)损伤的保护作用。方法采用体外细胞培养的方法,建立SH?SY5Y细胞NMDA损伤模型。分设对照组(0 mmol/L NMDA)、NMDA损伤模型(0μmol/L三叶苷)组、三叶苷组(10,50,100μmol/L)。对照组正常培养,NMDA损伤模型组以2 mmol/L的NMDA为造模浓度,三叶苷组在NMDA损伤模型组的基础上分别以10,50,100μmol/L的三叶苷为细胞活性测试浓度。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)测定三叶苷对SH?SY5Y细胞活性的影响;通过MTT法、乳酸脱氢酶(LDH)释放量检测三叶苷对NMDA诱导SH?SY5Y细胞损伤的保护作用,用蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞内促凋亡蛋白Bax,抗凋亡蛋白Bcl?2及NMDA受体调节亚单位NR2B蛋白表达水平,研究其作用机制。结果三叶苷在1~100 mmoL/L范围内不影响SH?SY5Y细胞的存活率。与对照组相比,NMDA损伤模型组细胞存活率为(53.13±3.31)%,细胞存活率明显降低,细胞凋亡明显增高。与对照组相比,三叶苷组(10,50,100μmol/L)细胞存活率分别为(56.28±2.05)%、(68.64±1.74)%及(75.98±1.84)%,细胞存活率明显增高(F=293.3,P<0.001),LDH释放量减少,细胞凋亡明显降低(F=314.1,P<0.001)。三叶苷参与调控NR2B亚单位及凋亡相关蛋白的表达,可降低NR2B蛋白与促凋亡蛋白Bax的表达,上调抗凋亡蛋白Bcl?2的表达。结论三叶苷对NMDA诱导的神经母细胞瘤SH?SY5Y细胞损伤有保护作用,其作用机制与NR2B亚单位相关。