SRAP分子标记用于苦荞分析中的条件优化

摘要

[目的]研究SRAP分子标记用于苦荞分析中的条件优化.[方法]采用交互正交设计L27(313)对苦荞SRAP-PCR反应体系进行了5因素(Mg2+、dNTP、Taq酶、模板DNA和引物)3水平优化筛选,比较了非变性和变性PAGE检测方法,并进行了DYCZ-24F与DYCZ-20C 2种电泳操作系统的对比试验.[结果]4个单因素(Mg2+、dNTP、Taq酶和引物)和2个交互作用(Mg2+×dNTP、Mg2+×Taq酶)对苦荞SRAP-PCR有极显著影响;最佳反应体系为:20 μl总体积,Mg2+ 1.5 mmol/L,dNTP 0.2 mmol/L,Taq酶1.5 U,模板DNA 40 ng,引物0.25 μmol/L,10×缓冲液 2 μl.运用该体系对7份苦荞材料进行扩增,电泳结果显示扩增条带清晰、多态性高、重复性好.将扩增产物进行非变性与变性PAGE和2种电泳操作系统检测,结果显示,非变性PAGE、DYCZ-24F操作系统更适合于SRAP的分析.[结论]该研究为今后构建苦荞SRAP遗传图谱奠定了基础.