蓝氏贾第鞭毛虫PPDK特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建及鉴定

摘要

丙酮酸磷酸双激酶(Pymvate phosphate dikinase,PPDK)可能是蓝氏贾第鞭毛虫能量代谢中具有催化作用的关键酶桩一.为了进一步探讨该酶在贾第虫能量代谢中的作用,本文采用RNA draw软件分析贾第虫编码PPDK的基因序列并设计特异性反义锤头状核酶(Hammerheade ribozyme),克隆该核酶序列并与犬贾第虫病毒(GCV)连接,构建了载有特异性锤头状核酶的贾第虫病毒重组载体pGCV634/H5/2174.该载体经线性化处理后进行体外转录,转录产物以电击方式转染对数生长期的贾第虫滋养体.提取转染后24 h虫体总RNA,并以其为模板进行RT-PcR验证转染效果和对靶mRNA的切割效果.结果初步证实了该载体对虫体细胞内编码PPDK的mRNA具有切割作用.