恶性疟原虫环子孢子蛋白单链抗体与按蚊cecropin A融合基因的构建、原核表达及生物学活性的初步分析

摘要

根据按蚊偏嗜性密码子对鼠源性恶性疟原虫环子孢子蛋白单链抗体2a10基因进行改造,并融合按蚊抗菌肽cecropin A编码基因.将获得的cecrop-m2a10融合基因克隆人原核表达载体pET32a(+)中,对表达产物进行SDS-PAGE、western-blot分析并利用琼脂糖扩散法检测其抗菌活性.结果对鼠源性环子孢子蛋白单链抗体2a10中6种氨基酸的170个核苷酸进行了改造,融合cecropin A编码基因,成功构建了cecrop-m2a10融合基因.靶基因在大肠杆菌中以融合蛋白和包涵体的形式高效表达,包涵体经尿素溶解变性及透析复性后表达蛋白的纯度达75%并具备抗大肠杆菌DH5a的活性.本实验为进一步研究cecrop-m2a10在转基因蚊中的多重抗病原效应提供了基础.