基于TaqMan MGB探针的人粪便中华支睾吸虫虫卵实时荧光PCR检测方法的建立及应用

摘要

本研究根据华支睾吸虫cox 1基因序列设计合成特异性引物和探针,建立基于TaqMan MGB探针的人粪便中华支睾吸虫虫卵实时荧光PCR检测方法,同时评价该方法的特异性、敏感性、重复性。采用建立的荧光PCR方法对临床样本进行检测,并与改良加藤厚涂片法检测结果进行比对。结果显示,本研究建立的方法与形态和种属关系相近的寄生虫无交叉反应;以9.97×10^(7)~9.97×10^(0)copies/μL浓度的质粒作为标准品建立标准曲线,检测灵敏度为9.97 copies/μL;组内、组间重复性试验变异系数均小于0.4%。采用该方法检测280份居民粪便样本,检出阳性54份,经对比该方法敏感性高于改良加藤厚涂片法。本研究所建立的方法可用于华支睾吸虫虫卵的检测及诊断。