高产稳产聚羟基烷酸的重组大肠杆菌的构建

摘要

重组大肠杆菌Escherichia coliHMSl74(pTZl8U-PHB)含有携带聚羟基烷酸(PHA)合成基因(phaCAB)**的质粒pTZl8U-PHB,是很有潜力的PHA生产菌,但存在着质粒不稳定和不能合成3-羟基丁酸(3HB)与3-羟基戊酸(3HV)共聚物[P(3HB-co-3HV)]的缺陷.将RK2质粒上的par DE基因引入pTZl8U-PHB构成质粒pJMC2,该质粒可以在宿主E.coliHMSl74中稳定遗传.将培养基中的磷酸盐浓度降至18 mmol/L,发现E.coli HMSI174(pJMC2)能够以丙酸为前体合成P(3HB-co-3HV),其中3HV在共聚物中的含量为5%～8%.在5L自动发酵罐中分批补料培养E.coli HMSl74(pJMC2),培养基初始磷酸盐浓度为15mmol/L,30h后每升培养液中干菌体可达42.5e,P(3HB-co-3HV)占干重的70%,其中3HV在共聚物中的含量为4.9%.