苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因cry1Ab16的克隆及表达

摘要

通过对已知cry1类基因以及已发表的cry1Ab的序列进行分析,分别设计了引物P1、P2、P3和P4,首次从无晶体的芽胞杆菌AC-11中扩增到一个苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白(Insecticidal crystal protein, ICP)cry1Ab类基因.测序结果显示该基因与已知的cry1Ab1基因有8个核苷酸不同,编码的蛋白有7个氨基酸差异.此基因已登录GenBank,并命名为新亚型基因cry1Ab16 (Ac. NO. AF375608).Southern杂交结果进一步证实该基因存在于菌体的质粒上.将cry1Ab16基因克隆到Escherichia coli表达载体pQE30上并转化E. coli M15.Western印迹分析表明,E. coli M15表达了130 kD的Cry1Ab16蛋白,但此蛋白不稳定,大部分降解成65 kD的蛋白.将表达Cry1Ab16 蛋白的大肠杆菌用涂布法对三龄小菜蛾(Plutella xylostella)毒力测定,其LC50为258.3mg/L;对其他夜蛾科害虫的生长发育也有明显的抑制作用.