大肠杆菌胸腺嘧啶合成酶thyA缺失突变菌株的构建

摘要

大肠杆菌K-12 DY330菌株的染色体上整合有一种新型的同源重组系统--缺陷型λ原噬菌体同源重组系统.以DY330为出发菌,通过同源重组构建大肠杆菌thyA-株DY330-TI,其基因组特点是:thyA基因除保留N端的1～49氨基酸残基相对应的必需核苷酸序列外,将其余部分全部缺失;此外,还敲除了DY330-TI中与缺陷型λ原噬菌体同源重组功能相关的基因,从而尽可能避免了通过同源重组产生回复突变的可能性.通过大肠杆菌thyA基因对该突变株的转化实验,检测转化子的回复突变率,进一步证实该突变株的突变性状稳定,为构建以thyA为选择标志的大肠杆菌染色体-质粒平衡致死系统提供了合适的缺陷型宿主菌.