短双歧杆菌α-D-半乳糖苷酶基因aga1在大肠杆菌中的高效表达

摘要

短双歧杆菌(Bifidobacterium breve 203)α-D-半乳糖苷酶基因(aga1)被克隆到大肠杆菌温度诱导表达质粒pBV220中,构建重组质粒pBVaga1,转入大肠杆菌进行温度诱导表达,得到的重组酶Aga1在大肠杆菌DH5α、DH10B和BL21中的比活分别为28.08、19.44和13.85U/mg, 均高于短双歧杆菌α-D-半乳糖苷酶的比活1.76U/mg.重组质粒pBVaga1在E. coli BL21中稳定性较好.重组酶Aga1蛋白亚基分子量约67kD,最适反应温度为45℃,酶在40℃以下稳定,60℃仅剩余约5%的酶活性,70℃时酶全部失活;最适反应pH为4.0～4.4,酶在pH 3.6～6.0范围内稳定;酶对p-硝基苯酚-α-半乳糖苷的Km＝1.43mmol/L,Vmax＝35.71μmol/(L·min),对蜜二糖的Km＝261mmol/L,Vmax＝63.69μmol/(L·min);酶在蜜二糖、棉子糖水解体系中不显示转糖基活性.结果说明Aga1与已经报道的一种短双歧杆菌的α-D-半乳糖苷酶不同,是新发现的一种短双歧杆菌的α-D-半乳糖苷酶.