共存于厌氧真菌分离培养液中瘤胃甲烷菌的检测及其多样性分析

摘要

对分离自山羊瘤胃的真菌分离培养液中甲烷菌进行16S rDNA扩增、DGGE分析、RFLP及测序分析,研究共存于真菌分离培养液中甲烷菌的种类及其多样性.DGGE结果显示:从厌氧真菌分离至第45代,甲烷菌多样性指数由1.32降至0.99,相似性最低为34.7%;第45代至62代,多样性指数由0.99升至1.15,相似性最低为89.2%.RFLP多态性分析69个克隆共得到5个操作分类单元,选择其中6个具有代表性的序列进行测序.序列及系统进化分析表明,属于其中3个操作分类单元的克隆最相似菌都是Uncultured archaeal symbiont PA202,相似性均为95%,没有与这些克隆相似性较高的已培养甲烷菌;属于另外2个操作分类单元的克隆最相似菌都是Uncultured rumen methanogen 956,相似性均为97%,最相似已知菌为Methanobrevibacter sp. NT7,相似性为97%.结果表明,真菌培养液中存在目前尚未分离培养的瘤胃甲烷菌.