水貂阿留申病毒VP2蛋白主要抗原表位基因原核表达及其检测应用

摘要

将构建好的重组质粒pMD-VP2a、pMD-VP2b分别经双酶切获得基因片段VP2a、VP2b,分别将其定向插入到原核表达载体pMAL-c2中,构建原核表达载体pMAL-VPa和pMAL-VPb.阳性重组质粒转化宿主菌TB1,经IPTG诱导,两段基因均获得表达;Western blot分析表明表达蛋白具有良好的抗原性.用KCI染色后,切胶回收的方法对表达蛋白进行纯化,以纯化的目的蛋白作为诊断抗原初步建立了水貂阿留申的VP2-CIEP诊断方法.结果表明该方法具有较高的灵敏性和特异性,与传统的CIEP方法的检出符合率达94.3%.