细极链格孢菌peaT2基因在毕赤酵母中的表达及蛋白功能确定

摘要

从细极链格孢菌表达文库获得阳性克隆子,序列分析表明,克隆的DNA片段中含有完整的开放阅读框架,将该基因命名为peaT2(GenBank登录号为EF212880).用PCR法扩增peaT2基因的编码序列并亚克隆到毕赤酵母表达系统的表达载体pPIC9K上,得到重组质粒pPIC9K/peaT2.重组质粒经Sac Ⅰ线性化后用电穿孔法导入到毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,采用MD、G418-YPD平板和PCR法筛选Mut+表型,获得了分泌表达的重组毕赤酵母.随机挑取一菌株作为表达菌,用甲醇诱导PeaT2蛋白表达.SDS-PAGE及Western blot检测结果均表明PeaT2在毕赤酵母中成功地分泌表达.用peaT2基因的表达蛋白处理小麦种子,生物测定表明,表达蛋白能明显促进小麦的生长,具有蛋白激发子作用.