一株产纤溶酶芽孢杆菌的鉴定及纤溶酶的分离纯化与性质分析

摘要

[目的]从假蕈状芽孢杆菌B-60菌株中纯化具有纤溶活性的单一组分,测定它的N-端氨基酸序列进行比对,并对单一组分的性质进行分析.[方法]利用纤维蛋白平板法检测纤溶酶活性,利用硫酸铵分级沉淀和阴离子交换色谱从假蕈状芽孢杆菌B-60菌株中纯化纤溶酶.[结果]从该菌株的发酵液中获得了一组纤溶酶单一组分(BpFE),它的表观分子量为34 kDa.它在4℃～50℃活性较稳定,50℃以上活性急剧下降;作用最适pH值为pH5～6,在pH5～10活性较稳定,在pH3.0,活性几乎丧失;金属离子Ca2+、Mg2+、Mn2+对酶活有轻微促进作用,Cu2+则强烈抑制酶活.苯甲基磺酰氟(PMSF)完全抑制它的活性.BpFE经胰蛋白酶和胃蛋白酶降解后,活性上升.测得BpFE N-端15个氨基酸序列为VTGTNAVGTGKGVLG序列比对结果表明,BpFE N-端15个氨基酸序列与来源于蜡状芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、炭疽芽孢杆菌和乳杆菌的细菌裂解酶、中性蛋白酶、水解酶的部分序列同源性为100%.[结论]获得了一组纤溶酶单一组分,其N-端序列比对结果尚未发现与其同源性较高的纤溶酶,这为新型纤溶酶的开发提供了重要的理论依据.