杀粉蝶菌素A1生物合成基因簇中甲基转移酶PieB2的功能

摘要

[目的]研究杀粉蝶菌素A1产生菌中甲基转移酶基因pieB2的功能.[方法]利用接合转移和同源重组双交换的方法,构建pieB2基因缺失突变株,以及利用接合转移的方法,构建回补菌株.通过高保真PCR克隆pieB2基因到表达载体pET28a上,构建质粒pJTU5997,转化人大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pLysE中诱导表达.利用高效液相色谱检测PieB2的体外酶活.[结果]获得了pieB2基因缺失的双交换突变株.发酵结果显示,该突变株不再产生杀粉蝶菌素A1,而是积累了一种脱甲基产物.N-末端融合组氨酸标签的PieB2在大肠杆菌中获得可溶性表达,通过体外催化证明了PieB2甲基转移酶的功能.[结论]体内遗传实验和体外生化实验证明了PieB2作为甲基转移酶在杀粉蝶菌素A1合成中的作用.