TRPC6通过AKT/GSK-3β和ERK信号通路抑制心肌纤维化的形成

摘要

目的 探讨瞬时受体电位通道6 (transient receptor potential canonical 6,TRPC6)介导的蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/糖原合酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)和胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)蛋白信号通路在异丙肾上腺素(isoprenallne,ISO)诱导心肌纤维化中的作用.方法 取野生型(wild type,WT)和TRPC6基因敲除型(TRPC6 knockout,TRPC6-/-)小鼠各40只,分别使用生理盐水(Saline)和ISO进行注射,根据基因型和注射药物的不同将实验小鼠随机分为以下4组:WT Saline组;WT ISO组;TRPC6-/-Saline组;TRPC6-/-ISO组;用组织免疫荧光技术检测TRPC6通道蛋白在心肌组织中表达水平的差异;用苏木精-伊红(hematoxylineosin,HE)、Masson、天狼猩红等组织化学染色法检测心肌组织的纤维化表现;用Western blot(WB)检测小鼠心肌组织蛋白中纤维化及相关通路指标.结果 WT ISO组小鼠心肌细胞内出现明显空泡坏死,细胞间炎性细胞浸润,心肌细胞排列紊乱、胶原蛋白纤维沉积明显增加,与之相比,TRPC6-/-ISO组小鼠心肌细胞坏死及炎性细胞浸润较少,胶原纤维沉积显著低于WTISO组;WB结果显示,WT ISO组小鼠心肌组织内TRPC6表达水平升高;与相应的Saline组相比,WT ISO和TRPC6-/-ISO组小鼠心肌组织中α-平滑肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ,COL-1)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated-protein kinase B,p-AKT)、磷酸化糖原合酶激酶-3β(phosphorylated-glycogen synthase kinase-3β,p-GSK-3β)及磷酸化胞外信号调节激酶(phosphorylated-extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)蛋白表达量明显增加,但TRPC6-/-ISO组表达水平较WT ISO组明显降低.结论 TRPC6基因敲除可通过下调AKT/ GSK-3β及ERK信号通路的活性,减轻ISO诱导的心肌纤维化.