载脂蛋白E3及其突变体apoE2、apoE4的克隆与表达

摘要

目的克隆人3种类型载脂蛋白E (apolipoprotein E,apoE) cDNA,表达并纯化3种apoE融合蛋白.方法采用RT-PCR方法从肝组织中克隆得到apoE3 cDNA,以此为基础通过定点突变得到apoE2和apoE4的cDNA.将上述3种cDNA亚克隆到含有His标签的融合表达载体pT7-PL中,表达的蛋白经镍离子柱亲和层析纯化.结果序列分析表明,获得的apoE2、apoE3、apoE4与GenBank中的一致.表达并纯化了N端带有6个组氨酸的apoE2、apoE3、apoE4融合蛋白.结论成功地获得了人3种类型apoE cDNA和3种apoE融合蛋白.