99mTc标记的寡核苷酸在人卵巢癌细胞中的摄取及其对目的基因表达的影响

摘要

目的研究针对增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA的反义寡核苷酸的标记方法,标记后探针在卵巢癌细胞株HO8910中的摄取情况及其对细胞增殖和目的基因表达的影响.方法人工合成一段针对PCNA mRNA的反义寡核苷酸(ASON),以放射性核素 99mTc进行标记,研究标记物的标记率,放射化学纯度,与互补正义链寡核苷酸(SON)的结合能力,不同温度条件下在卵巢癌细胞中的摄取情况, 以及反义探针对细胞增殖和细胞PCNA mRNA表达的影响.结果在双功能螯和剂NHS-MAG3的作用下,ASON的标记率为(60.12±3.01)%(n=5),经纯化后放射化学纯度可达95%以上;标记物在体外能稳定存在,且仍保持与互补链的结合能力;37 ℃和22 ℃条件下,细胞对ASON的摄取率高于对SON,对ASON的清除速度缓于对SON,而37 ℃时,细胞对ASON的摄取明显高于22 ℃时,清除速度则明显快于22 ℃.标记的ASON与细胞孵育48 h后, HO8910细胞中PCNA mRNA的表达显著减少.结论在双功能螯和剂的作用下,寡核苷酸能成功地得到标记,与SON相比,反义探针能被代谢旺盛的HO8910细胞特异性摄取并抑制目的基因的表达.