A20和Caspase 3在异基因CD8+ T细胞致人脐静脉内皮细胞凋亡中的表达及意义

摘要

目的 探讨异基因造血干细胞移植时,供体CD8+T细胞致受体人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡中A20蛋白及Caspase 3的表达及意义.方法 采用密度梯度法分离人周围血单个核细胞,CD8+ T细胞亚群阴性分选柱试剂盒分选出CD8+T细胞.HUVEC细胞株经过5 ng/ml TNF-α处理后与CD8+T细胞进行混合培养.以AnnexinⅤ和PI双标后,流式细胞仪对HUVEC进行凋亡分析,用全波长荧光分光光度计测定凋亡相关蛋白Caspase 3的活性.Western blot法检测HUVEC中A20蛋白的表达.结果 异基因CD8+T细胞在与HUVEC混合后可引起HUVEC凋亡,流式细胞仪检测显示24 h时的早期凋亡率最高,达(83.6±0.42)%.而晚期凋亡相关蛋白Caspase 3活性在48 h时达高峰,荧光强度为(13.585±0.269), 此后显著降低,与对照组比较差异有极显著性意义(P<0.01).A20蛋白的表达与HUVEC的凋亡率呈负相关(r=-0.839, P<0.05).结论 体外供体CD8+T细胞致受体HUVEC凋亡过程中,信号蛋白Caspase 3的激活介导了凋亡的发生,而A20可能对其起负调节作用.